La diversité des polyphénols dans les grains des mils

Table des matières

Introduction
Revue bibliographique
I.Polyphénols
I.1. Généralités
I.2. Classification des composés phénoliques
I.2.1. Les flavonoïdes
I.2.2. Les non-flavonoïdes
I.3. La diversité des polyphénols dans les grains des mils
I.4. Effets immunomodulateurs et anticancéreux des polyphénols
II.La réponse immunitaire
II.1.Introduction
II.2. Les cellules immunocompétentes
II.2.1. Origine
II.2.3. Les lymphocytes T : rôle central dans la réponse immunitaire
II.3 L‟activation des lymphocytes T
II.3.1. Les récepteurs des cellules T
II.3.2. L‟activation des lymphocytes T par le TCR
II.3.3. La transduction du signal via le TCR
III. Ostéosarcome
III.1.Physiologie du tissu osseux
III.1.1. Généralités
III.1.2. Les fonctions physiologiques du tissu osseux
III.1.3. Composition du tissu osseux
III.1.4. Le remodelage osseux
III.2. Les tumeurs osseuses primitives
III.3. Epidémiologie des ostéosarcomes
III.4.Localisations des ostéosarcomes
III.5. Anomalies cytogénétiques et épigénétiques dans les ostéosarcomes
IV.L’apoptose
IV.1. Les morts cellulaires : définitions et caractéristiques
IV.2. Caractéristiques de l‟apoptose
IV.2.1. Critères morphologiques
IV.2.2. Critères biochimiques
IV.3. Les différentes voies de l’apoptose
IV.4. Rôle du calcium dans la régulation de l’apoptose
V.Objectifs généraux de la thèse
Etude expérimentale
I.Pouvoir antioxydant des polyphénols de mil
I.1. Préparation du matériel biologique végétal
I.2. Détermination du taux d‟humidité
I.3. Préparation des extraits polyphénoliques
I.4. Dosage des polyphénols
I.5. Dosage des flavonoïdes
I.6. La quantification des polyphénols par HPLC dans les grains de mil, cultivar Bechna
I.7. Pouvoir antioxydant in vitro de mil : test de DPPH
II. Effet immunomodulateur des polyphénols et des lipides de mil
II.1. Détermination de la composition en acides gras par chromatographie en phase gazeuse (CPG)
II.2. Isolement des lymphocytes T
II.3. Test de transformation lymphoblastique (TTL)
II.4. Préparation des échantillons pour Western blot
II.5. Détection des MAP kinases par Western blot
II.6. Détermination de l‟expression des ARNm par RTqPCR
II.7. Mesure de la signalisation calcique
III. Effet anticancéreux des polyphénols du mil
III.1. Culture cellulaire et traitements
III.1.1 Lignées cellulaires et entretien
III.1.2. Traitements PGPC, p-CA et 5-FU
III.1.3. Traitements avec les inhibiteurs
III.2. Mesure de la prolifération cellulaire
III.3. Marquage Annexin V et 7AAD
III.4. Détermination de l‟expression des ARNm par RTqPCR
III.5. Western blot
III.5.1. Extraction et dosage des protéines
III.5.2. Migration et transfert
III.5.5. Immunoblotting et révélation
III.5.6. Arrachage d‟anticorps et réutilisation de la membrane
III.6. Etude du cycle cellulaire sur cellules fixées par Cytométrie de flux
II.Analyse statistique
Résultats & dicussions
I.Pouvoir antioxydant des extrais polyphénoliques de grains de mil
I.1. Détermination du taux d’humidité
I.2. Rendements des extractions
I.3. Détermination de la teneur en polyphénols totaux
I.4. Détermination de la teneur en flavonoïdes
I.5. Le profil phénolique des grains du mil, cultivar Bechna
I.6. Pouvoir antioxydant: test DPPH antiradicalaire
I.7. Discussion
II.Les effets immuno-modulateurs de l’extrait polyphénolique et lipidique des grains de mil, Pennisetum glaucum, cultivar Bechna
II.1. La composition en acides gras des grains du mil, cultivar Bechna
II.2. PGPC et PGL diminuent la prolifération des lymphocytes T
II.3. PGL et PGPC diminuent l’activation de ERK1 / ERK2 induite par PMA
II.4. PGL et PGPC diminuentl‟expression d‟IL-2 dans l’ARNm
II.5. PGL et PGPC induisent des augmentations de [Ca2+]i dans les cellules T spléniques
II.5. Discussion
III. Effet anticancéreux de l’extrait polyphénolique des grains de mil, Pennisetum glaucum, cultivar Bechna
III.1. Viabilité cellulaire
III.2. Induction de l‟apoptose par PGPC et p-CA
III.3. Détection des protéines apoptotiques
III.4. Effet du PGPC sur l‟augmentation du Ca2+ intracellulaire dans les cellules U2OS
III.5. Effet de PGPC sur les voies de signalisation impliquées dans la prolifération des cellules U2OS
III.6. Analyse de la distribution du cycle cellulaire
III.7. Cyclines et CDK analyse d’expression
III.8. Discussion
Conclusion
Références bibliographiques