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Fibres optiques monomodes à saut d’indice : approche ondulatoire
Equation de propagation
Notion de modes guidés, de gaine, radiatifs
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Table des matières
1 Introduction
1.1 Motivations
1.2 Objectifs
1.3 Structure de ce mémoire
1.4 Collaboration
I État de l’art
2 Fibres optiques et réseaux de Bragg
2.1 Généralités sur les …bres optiques
2.1.1 Dé…nitions
2.1.2 Fibres optiques monomodes à saut d’indice : approche ondulatoire
2.1.2.1 Equation de propagation
2.1.2.2 Notion de modes guidés, de gaine, radiatifs
2.1.2.3 Notion d’indice e¤ectif
2.1.3 Un nouveau type de guide : les …bres microstructurées
2.1.3.1 Dé…nition
2.1.3.2 Principe de fonctionnement
2.1.4 Capteurs à Fibres Optiques (CFO)
2.1.4.1 Dé…nition
2.1.4.2 Modulation de la lumière et transduction
2.2 Réseaux de Bragg dans les …bres optiques
2.2.1 Dé…nition
2.2.2 Inscription de réseaux de Bragg
2.2.2.1 Photosensibilité des …bres dopées à l’oxyde de germanium
2.2.2.2 Méthodes d’inscription
2.2.3 Classi…cation des réseaux de Bragg
2.2.3.1 Réseaux de Bragg uniforme
2.2.3.2 Réseau à pas court et traits inclinés
2.2.4 Transducteurs à réseaux de Bragg
2.2.4.1 Sensibilité des réseaux standard
2.2.4.2 Sensibilité à l’indice de réfraction environnant
3 Principe de fonctionnement des biocapteurs
3.1 Dé…nition
3.2 Les biorécepteurs
3.2.1 Les anticorps
3.2.2 Les enzymes
3.2.3 L’ADN
3.2.4 Les cellules entières
3.3 Les méthodes de transduction
3.3.1 Les transducteurs thermiques
3.3.2 Les transducteurs électrochimiques
3.3.2.1 Capteurs potentiométriques
3.3.2.2 Capteurs ampérométriques
3.3.2.3 Capteurs conductimétriques
3.3.3 Les transducteurs acoustiques
3.3.3.1 Microbalance piézoélectrique ou à quartz
3.3.3.2 Capteur à bras de levier
3.3.4 Les transducteurs optiques
3.3.4.1 La détection de ‡uorescence
3.3.4.2 Capteurs ellipsométriques
3.3.4.3 Capteurs à ondes évanescentes
3.4 Les biocapteurs à …bres optiques
3.4.1 Dé…nitions
3.4.2 Biocapteurs …brés à ondes évanescentes « classiques »
3.4.3 Biocapteurs …brés à plasmons de surface
3.4.4 Biocapteurs …brés à réseaux de Bragg
3.4.5 Biocapteurs à …bres microstructurées
4 Fonctionnalisation chimique de surfaces
4.1 Biofonctionnalisation directe
4.1.1 L’adsorption
4.1.2 Le couplage covalent
4.1.3 La réticulation
4.2 Fonctionnalisation intermédiaire du substrat
4.2.1 Multicouches de polyélectrolytes
4.2.1.1 Dé…nition
4.2.1.2 Méthodes de dépôt
4.2.1.3 Multicouches à croissance linéaire
4.2.1.4 In‡uence des paramètres de construction
4.2.2 Polymères
4.2.2.1 Dé…nitions
4.2.2.2 Polymérisation grafting from
4.2.3 Silanisation des substrats de silice
4.2.4 Immobilisation du biorécepteur
4.2.4.1 Adsorption de protéines par interactions électrostatiques
4.2.4.2 Gre¤age covalent de biomolécules
4.2.4.3 A¢ nité avidine biotine
4.3 Conclusion
II Méthodologie développée
5 Matériels et méthodes de détection
5.1 Mesures spectrales
5.1.1 Description du montage
5.1.2 Principe de fonctionnement de la source accordable
5.1.3 Caractéristiques du montage
5.2 Inscription du réseau de Bragg à traits inclinés
5.2.1 Principe du montage à miroir de Lloyd
5.2.2 Inscription des réseaux standard
5.2.3 Inscription des réseaux à traits inclinés
5.3 Caractéristiques de la réponse spectrale en transmission d’un réseau de Bragg à traits inclinés
5.3.1 Couplage du mode fondamental vers les modes de gaine
5.3.2 Couplage du mode fondamental vers le continuum de modes radiatifs
5.3.3 Distance spectrale entre deux résonances consécutives
5.4 Analyse et traitement numérique des spectres
5.4.1 Approche discrète
5.4.1.1 Suivi du décalage spectral
5.4.1.2 Suivi de l’amplitude d’une unique résonance spectrale
5.4.2 Exemple d’approche globale : « méthode des aires »
5.4.3 Approche globale basée sur l’analyse fréquentielle du spectre
5.5 Le système BraggLight
6 Réalisation de biocapteurs mettant en œuvre la technologie des réseaux de Bragg
6.1 Méthode « tout électrostatique »
6.1.1 Matériel et réactifs
6.1.1.1 Cuve de fonctionnalisation
6.1.1.2 Polyélectrolytes
6.1.1.3 Protéines bioréceptrices
6.1.2 Protocole de biofonctionnalisation
6.1.2.1 Décapage de la surface de la …bre
6.1.2.2 Activation de la surface de silice
6.1.2.3 Dépôts d’une multicouche de polyélectrolytes
6.1.2.4 Adsorption de la biomolécule sonde
6.2 Stratégies visant à augmenter la stabilité du biorécepteur
6.2.1 Polymères portant la fonction carboxyle
6.2.1.1 Dextran carboxyméthylé
6.2.1.2 Acide polyacrylique
6.2.2 Glutaraldéhyde : utilisation de la fonction aldéhyde
6.2.3 Extravidine : utilisation de l’a¢ nité avidine-biotine
6.3 Méthode covalente
6.3.1 Matériel
6.3.2 Protocole de biofonctionnalisation
6.3.2.1 Activation
6.3.2.2 Silanisation
6.3.2.3 Gre¤age de l’amorceur
6.3.2.4 Polymérisation radicalaire sous UV
6.3.2.5 Gre¤age covalent de l’extravidine
6.3.2.6 Gre¤age du biorécepteur par a¢ nité avidine-biotine
III Expérimentation : résultats et discussion
7 Elaboration d’un biocapteur « tout électrostatique »
7.1 Construction de …lms de polyélectrolytes
7.1.1 Paramètres relatifs à la construction d’une multicouche
7.1.1.1 Notion d’indice moyen
7.1.1.2 Activation de la silice
7.1.2 Cinétiques des étapes de construction d’une multicouche
7.1.2.1 Concentrations et temps d’incubation : cas d’une multicouche PEI/DSS
7.1.2.2 Choix du solvant
7.1.2.3 Cinétique de croissance des …lms : « modèle des trois zones »
7.1.3 Interaction des polyélectrolytes avec le milieu extérieur
7.1.3.1 Indice de polymolécularité et longueur des chaînes polymères
7.1.3.2 Polyélectrolyte fort ou faible : Sensibilité vis-à-vis du pH
7.1.4 Point de fonctionnement
7.2 Adsorption d’une biomolécule sonde
7.2.1 Adsorption de molécules : modèle de Langmuir
7.2.1.1 Dé…nition
7.2.1.2 Linéarisation
7.2.2 Adsorption de l’Albumine de Sérum Bovin (BSA)
7.2.2.1 Choix de la concentration en BSA
7.2.2.2 Caractérisation de la surface fonctionnalisée par microscopie à force atomique
7.2.2.3 Cinétique d’adsorption de la biomolécule sonde
8 Performances et limites du biocapteur « tout électrostatique » : introduction de l’extravidine
8.1 Performances du biocapteur « tout électrostatique »
8.1.1 Reconnaissance anticorps-antigène
8.1.2 Détection quantitative d’anti-BSA
8.1.3 Analyse des performances du biocapteur « tout électrostatique »
8.1.3.1 Sensibilité et limite de détection
8.1.3.2 A¢ nité et concentration limite
8.2 Limites du « tout électrostatique » et utilisation de l’a¢ nité avidine-biotine
8.2.1 Dépendance vis-à-vis de la biomolécule sonde
8.2.2 Spéci…cité de la mesure assurée par l’a¢ nité avidine-biotine
8.2.3 Biofonctionnalisation de la multicouche de polyélectrolytes
8.2.4 Détection quantitative d’anti-BSA
8.2.5 Performances du biocapteur « électrostatique-extravidine-biotine »
9 Biocapteur issu d’une fonctionnalisation du substrat de silice faisant intervenir des liaisons covalentes
9.1 Fonctionnalisation covalente du substrat de silice
9.1.1 Préparation du substrat de silice
9.1.1.1 Activation de la silice, silanisation et séchage
9.1.1.2 Préparation et gre¤age de l’amorceur
9.1.2 Polymérisation in situ
9.1.3 Couplage covalent de l’extravidine
9.2 Gre¤age de la protéine sonde et détection d’anticorps
9.2.1 Gre¤age de la protéine sonde
9.2.2 Détection quantitative d’anti-BSA
9.2.3 Performances du biocapteur « covalent-extravidine-biotine »
9.2.4 Comparaison des biocapteurs « tout électrostatique » ,
« électrostatique-extravidine-biotine » et « covalent-extravidinebiotine »
9.2.5 Mesure expérimentale de la concentration limite
9.3 Limitations, discussion et perspectives
9.3.1 Sensibilité de l’acide polyacrylique vis-à-vis des variations de pH
9.3.2 Choix d’un domaine d’application
9.3.3 Exemple de stratégie adaptée à la détection de très petites molécules : détection par voie indirecte.
10 Conclusion et Perspectives
10.1 Conclusion générale
10.1.1 Développement des biocapteurs à réseaux de Bragg en angle
10.1.2 Détection de biomolécules cibles
10.2 Perspectives de recherches
10.2.1 Etude de nouveaux biorécepteurs et adaptation du mode de détection
10.2.2 Evolution vers l’utilisation de …bre microstructurées
Liste des tableaux
Bibliographie
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