PFE & RAPPORT Apport de la biologie moléculaire dans la détection de la mutation du gène NKX2.5 impliqué dans les cardiopathies congénitales PDF
Liste des Abréviations
Liste des Figures
Liste des tableaux
Lieu de Stage
Objectif de stage
Introduction générale
Chapitre 1 : Revue bibliographique
I-Rappel sur le cœur
II- Embryologie et circulation fœtale
A – Embryologie
1- Cloisonnement du cœur
a- Cloisonnement de l’oreillette
b- Cloisonnement du CAV
c- Cloisonnement des ventricules
B- Circulation fœtale
III- Epidémiologie et étiologie des cardiopathies congénitales
IV- Classification des cardiopathies congénitales
V- Bases moléculaires et génétiques des cardiopathies Congénitales
VI- Diagnostic des cardiopathies congénitales
A- Clinique
B- Para clinique
C- VII- Traitement des cardiopathies Congénitales
A-Traitement médicamenteux
B-Traitement chirurgical
C- Cathétérisme interventionnel
Chapitre 2 : Matériel et méthodes
A) Matériel utilisé
1- Echantillonnage
a- Patients
2- Stratégie de travail
B)- Méthode
I)- extraction d’ADN
1)- principe
2)-Protocole expérimental
a)-lyse des globules rouges
b)-lyse des globules blancs
c)- Dénaturation et précipitation des protéines et impuretés
d)- Précipitation et lavage de l’ADN
II- Dosage de l’ADN extrait
III. Amplification de l’ADN extrait par PCR
1-Principe
2-Réactifs nécessaires
3- Protocole expérimental
IV)- Visualisation du produit PCR par électrophorèse sur gel d’agarose
1- Principe
2- Protocole expérimental
V)- séquençage des produits PCR du gène NKX2.5
A- Purification du produit PCR par ExoSAP
1)-principe
2)- réactifs nécessaires
3)- protocole expérimental
B- Réaction de séquence par BigDye
1)-principe
2)- réactifs nécessaires
3)- protocole expérimental
C- Purification du produit de la réaction de séquence
1)-principe
2)- réactifs nécessaires
3)- protocole expérimental
D- Chargement de l’appareil
I- Les outils bioinformatiques
Chapitre 3 : Résultats et discussion
I-Dosage et qualité d’ADN extrait
II- La réaction de polymérisation en chaine (PCR) et séquençage
A- Résultats de la PCR des exons du gène NKX2 .5 des différents patients
B- Séquençage, analyse des séquences et mutations détectées
Conclusion
Références bibliographique
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Les cardiopathies congénitales appartiennent aux malformations congénitales les plus fréquentes. Ce sont des anomalies cardiaques survenant au cours de la formation du cœur pendant la vie intra-utérine. On recense aujourd’hui plus de 200 cardiopathies congénitales différentes, allant des formes les plus simples aux plus complexes.
Elles peuvent être définies comme des malformations du cœur et/ou des vaisseaux, présentes dès la naissance. Elles touchent près de 1% des nouveau-nés et représentent la cause la plus fréquente de mortalité infantile liée à une anomalie du développement. Plus de 29 % des enfants décédés d’une anomalie congénitale présentent un défaut cardiaque.
Les cardiopathies congénitales sont le plus souvent isolées, et leur caractère familial conduit à une demande d’exploration génétique. Leur diagnostic est facilité par les nouvelles techniques non invasives d’exploration telles que l’échocardiographie, le doppler pulsé ou l’IRM. Leur prise en charge repose, dans la grande majorité des cas, sur des techniques chirurgicales modernes qui ont transformé le pronostic de ces malformations.
Les malformations cardiaques sont aujourd’hui de mieux en mieux connues au Maroc grâce à la disponibilité de l’échocardiographie doppler, qui constitue la base du diagnostic. De grandes avancées ont été réalisées ces dernières années dans la compréhension des bases moléculaires et génétiques des cardiopathies congénitales humaines. L’identification des gènes impliqués dans les malformations cardiaques a conduit à une nouvelle approche clinique chez les enfants atteints de cardiopathies ainsi que leurs familles. Ces progrès ont été rendus possibles grâce aux techniques de biologie moléculaire.
Récemment, la recherche s’est orientée vers l’identification des facteurs de transcription qui contrôlent le programme génétique cardiaque, jouant ainsi un rôle essentiel dans la régulation transcriptionnelle.
Les défauts de septation cardiaque sont des maladies génétiques autosomiques dominantes caractérisées par un shunt gauche-droit. Environ 50 % des cardiopathies congénitales sont dues à des défauts de septation, qui sont considérés comme les plus fréquentes. Parmi les gènes responsables de ces défauts, on retrouve le gène NKX2.5, un gène homéotique indispensable au développement cardiaque normal. Ce gène est localisé sur le chromosome 5q35 et code un facteur de transcription, NKX2.5, qui joue un rôle prépondérant dans la régulation de la septation et la morphogenèse cardiaque. Les mutations de ce gène sont associées à des cardiopathies congénitales humaines, notamment les défauts de septation cardiaque.
