La diarrhée est caractérisée par l’émission de selles molles ou liquides trop fréquentes. Elle est généralement accompagnée de douleur ou de crampes intestinales qui rendent le sujet mal à l’aise (OMS, 1989). C’est un problème de santé publique en particulier dans les pays en voie de développement (BALAJI et al., 2012). Le taux de mortalité liée aux diarrhées chez l’enfant de moins de 5 ans est égal à 15,2 % dans le continent Africain et d’Asie du sud-est (RANDREMANANA., 2012). A Madagascar, la diarrhée fait partie des causes de la mortalité infantile, avec une prévalence de 17 %. Elle constitue la 3ème cause de décès après la pneumonie (21 %) et le paludisme (20 %) (UNICEF, 2014). Chaque année, environ 44000 enfants en meurent. En général, elle est due à un problème d’hygiène, d’insalubrité des aliments ou de l’eau (LEFLAIVE, 2012).
Cette maladie est due au déséquilibre entre l’absorption et la sécrétion hydro électrolytique au niveau de la paroi intestinale (BOURILLON et al., 2008) . Selon sa durée, la diarrhée peut être classée en deux catégories : la diarrhée aigüe et la diarrhée chronique. La diarrhée aigüe est caractérisée par un début brutal qui ne dure que quelques jours. Elle peut être d’origine bactérienne, parasitaire ou virale. Les bactéries responsables sont souvent Campylobacter jejuni, Salmonella typhi, Escherichia coli et Shigella dysenteriae. Parmi les parasites qui provoquent cette maladie, citons Balantidium coli et Giardia intestinalis (SAURABH et al., 2008). Enfin, les rotavirus, adénovirus, astrovirus et calicivirus provoquent aussi la diarrhée (OLIVIER et al., 2008). Ces germes pathogènes pénètrent dans la paroi intestinale et libèrent des toxines qui l’endommagent. Cela affecte l’échange d’eau et des électrolytes à travers la paroi, il en résulte une augmentation de sécrétion de fluide dans la lumière intestinale (BELAICHE, 2000).
PARTIE PHYTOCHIMIQUE
Préparation de l’extrait RDA07
Les feuilles de la plante utilisée dans ce travail ont été récoltées au mois d’Aout 2017 dans la région d’Atsimondrano. Elles ont été séchées à l’ombre, dans une salle aérée, à la température ambiante, pendant 3 semaines. Ensuite 200 g de matière végétale sèche ont été broyés à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMRTON, SERIE 2000©) au Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC), de la Faculté de Sciences, de l’Université d’Antananarivo. Deux cent grammes de la poudre obtenue ont été macérés dans 1,5 litre d’un mélange éthanol-eau (60 : 40), à la température ambiante, pendant 3 jours. Le macérât a été agité une fois par jour, pendant 10 minutes. Ensuite, il a été filtré sur du coton hydrophile et le filtrat récupéré a été évaporé à l’aide d’un distillateur à la température de 80° C, puis dans un bain marie, à la température de 100° C jusqu’à l’évaporation totale du solvant .
Les animaux utilisés pour l’expérimentation
Des cochons d’inde mâles et femelles âgés de 3 à 5 mois, pesant entre 200 et 300 grammes ont été utilisés pour toutes les expériences. Ils ont été élevés à l’animalerie du LPGPC à la température de 25°C, avec un cycle de 12 heures de lumière et 12 heures d’obscurité. Ils ont été nourris avec des feuilles de graminées. Ils ont été mis à jeun pendant 18 heures avant les tests, mais ont eu un accès libre à de l’eau. Pour les tests in vivo, les animaux ont été répartis en 4 lots : un lot témoin et trois lots traités avec RDA07. Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale, tandis que les animaux des trois autres lots ont respectivement reçu de l’extrait RDA07 aux doses de 100, 200 et 400 mg/kg administrés par voie orale dans 10 ml/kg d’eau distillée.
Étude de l’extrait sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
Quarante-cinq minutes après l’administration de l’eau distillée chez les animaux du lot témoin, et de l’extrait chez les animaux des autres 3 lots, 1 ml d’huile de ricin a été administré par voie orale chez tous les animaux (AKUODOR et al., 2011). Trente minutes après l’administration de l’huile de ricin, les animaux ont été ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique, puis exsanguinés en coupant les deux carotides. Ensuite, une laparotomie a été effectuée, puis l’intestin grêle a été repéré. Une ligature a été effectuée au niveau du pylore et une autre au niveau de la jonction iléo-caecale. L’intestin entre ces deux nœuds a été prélevé, et son contenu a ensuite été recueilli dans un récipient. Ce fluide a été ensuite centrifugé à la vitesse de 3000 tours par minute, pendant 10 minutes, puis le surnageant a été récupéré dans un récipient gradué et son volume a été mesuré (MAMINILAINORO, 1996).
Étude de l’effet de l’extrait RDA07sur motilité intestinale
L’action de l’extrait RDA07 sur la motilité intestinale a été étudiée in vitro sur la contraction de l’iléon isolé de cochon d’inde provoquée par l’acétylcholine (FERRON, 2008) Après la seconde période de stabilisation, l’acétylcholine a été injectée dans le bain d’une manière cumulative, à partir de 10⁻⁹ M jusqu’à l’obtention de la contraction maximale, dont l’amplitude a été considérée comme 100 %. Ensuite, l’extrait RDA07 a été injecté dans le bain d’une manière cumulative jusqu’au relâchement total de l’organe. La somme du volume des solutions injectées dans le bain n’a pas excédé de 10 % du volume du bain (CAVALCANTE et al., 2012). Les contractions ont été enregistrées avec un capteur isométrique (Statham Gould) et l’amplitude de chaque contraction a été mesurée, puis exprimée en fonction de l’amplitude maximale. Ensuite, une courbe montrant la relation entre l’amplitude et la concentration a été tracée sur une échelle semi logarithmique, puis la CE50 de l’acétylcholine et celle de l’extrait ont été déterminées graphiquement.
Étude du mécanisme d’action de l’extrait RDA07
Le mécanisme d’action de l’extrait a été étudié in vitro sur l’iléon isolé de cochon d’Inde, en utilisant l’acétylcholine comme agent contracturant. L’organe a été pré incubé dans un bain contenant de l’extrait à différentes concentrations avant de le contracter avec l’acétylcholine (FERRON, 2008). L’iléon isolé a été monté dans une cuve à organe isolé contenant 20 ml de solution de Tyrode maintenue à la température de 37° C, et aérée avec de l’air. L’organe a ensuite été laissé se stabiliser pendant 45 minutes, puis il a été sensibilisé avec d’acétylcholine à la concentration de 10⁻⁴ M dans le bain. Après la sensibilisation, il a été rincé et laissé se stabiliser de nouveau. Pendant les périodes de stabilisation, l’organe a été rincé toutes le 15 minutes (EZIKE et al., 2014). Puis, l’extrait RDA07 a été injecté dans le bain afin de réaliser une concentration de 0,125 mg/ml dans le bain. L’organe a été laissé en contact avec l’extrait dans ce bain pendant 10 minutes. Ensuite, l’acétylcholine a été injectée dans le bain d’une manière cumulative afin d’obtenir des concentrations croissantes jusqu’à la contraction maximale de l’organe. Ensuite, l’organe a été rincé, puis laissé se stabiliser de nouveau pendant 45 minutes en le rinçant toutes les 15 minutes. La même manipulation a été répétée en pré-incubant l’organe dans un bain contenant l’extrait aux concentrations de 0,25 ; 0,5 puis 0,75 mg/ml. Les contractions en présence et en absence de l’extrait ont été enregistrées et leur amplitude a été mesurée et rapportée en fonction de la concentration de l’acétylcholine et de l’extrait dans le bain. L’amplitude de la contraction en fonction de la contraction de l’acétylcholine dans le bain a été rapportée sur une échelle semi logarithmique, puis la CE50 de l’acétylcholine en absence et en présence de l’extrait à différentes concentrations a été déterminée graphiquement.
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Table des matières
I. INTRODUCTION
II. MATERIÉLS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait RDA07
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation, répartition des animaux et voie d’administration des produits
2. Étude de l’effet de RDA07 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
3. Étude de l’effet de RDA07 sur le péristaltisme intestinal
4. Étude du mécanisme d’action de l’extrait RDA07
C. EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de RDA07 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
2. Effet de RDA07 sur la motilité intestinale
3. Mécanisme d’action de l’extrait RDA07
IV. DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
