Préparation du réactif du DNS

Table des matières

Introduction
Revue bibliographque
I. Cellulases
1. Les enzymes et leur mode d’action
1.1. Endoglucanases
1.2. Exoglucanases
2. Substrat
3. Micro-organismes producteurs des cellulases
4. Production des enzymes cellulolytiques
5. Applications des cellulases dans différents domaines
5.1. Industrie du textile
5.2. Extraction de l’huile d’olive
5.3. Extraction des caroténoïdes
5.4. Industrie alimentaire
5.5. Industrie de l’alimentation animale
5.6. Industrie du papier
II. Pectinases
1. Substrat
2. Structure des substances pectiques
3. Enzymes pectinolytiques
3.1. Classification des enzymes pectinolytiques
3.1.1 Pectinestérases (PE) ou pectine-méthylestérases (PME).
3.1.2. Dépolymérases
3.2. Régulation des enzymes pectinolytiques
4. Applications biotechnologiques
4.1. Extraction des jus de fruit
4.2. Traitement du textile
4.3. Extraction des huiles
III. Effet des agents physico-chimiques sur l’activité enzymatique
1. Effet de la température
2. Effet de du pH
Matériel et méthodes
I. Matériel biologique
II. Criblage des souches productrices d’enzyme
1. Activité cellulase
1.1. Milieu de la révélation
1.2. Révélation de l’activité cellulase
2. Activité pectinase
2.1. Milieu de la révélation de l’activité pectinase
2.1. Révélation de l’activité pectinase
3. Estimation des activités enzymatiques
III. Identification biochimique
1. Test de coloration de Gram
2. Test amylase
3. Test de croissance sur milieu 6,5% NaCl
4. Test Clarck et Lubs
5. Test de Citrate et Simmons
4 . Coloration des spores
5. Formation d’acide à partir d’arabinose
6. Test mannitol
IV. Indentification moléculaire
1. Extraction de l’ADN
1.1. Préparation des solutions
1.2. Etapes de l’extraction
2. Amplification par PCR
2.1. Principe
2.2. Les conditions de la PCR
2.3. Révélation de l’ADN
2.4. Chargement des puits
3. Purification des produits PCR
3.1. Elimination du Triton-X
3.2. Elimination des amorces
4. Réaction de séquençage
5. Analyse informatique des séquences
V. Dosage des sucres réducteurs par la méthode du DNS
1. Principe du dosage par le DNS
2. Préparation du réactif du DNS
3. Préparation de la gamme d’étalonnage du glucose
4. Conduite du dosage
VI. Effets des paramètres physico-chimiques sur l’activité enzymatique
1. Préparation du surnageant
2. Effet de la température
3. Effet de différentes concentrations d’urée
4. Effet du pH
5. Effet du SDS et β-mercaptoéthanol
Résultats et discussion
I. Mise en évidence des souches productrices des enzymes
1. Criblage des souches productrices de cellulase
2. Criblage des souches productrices des pectinases
II. Identification des souches actives
1. Identification biochimique
2. Identification moléculaire
III. Effets des paramètres physico-chimiques sur l’activité des enzymes.
1. Effet de la température
1.1. Activité cellulase
1.2 Activité pectinase
2. Effet du pH
2.1. Activité cellulase
2.2. Activité pectinase
3. Effet de l’urée
3.1. Activité cellulase
3.2. Activité pectinase
4. Effet du SDS et du β-mercaptoéthanol
Discussion
Conclusion et perspectives
Références bibliographiques