Criblage phytochimique

Un criblage phytochimique a été effectué sur l’extrait hydro alcoolique FHN08 pour déterminer les familles chimiques qu’il renferme. Pour réaliser ce test, des réactifs spécifiques pour chaque famille chimique ont été utilisés. Ces réactifs réagissent avec les familles chimiques correspondantes et donnent un précipité ou une coloration spécifique (Tableau I) (FONG H.H.S. et coll., 1977).

Les signes ci-dessous ont été utilisés afin d’exprimer la quantité relative des familles chimiques présentes dans l’extrait FHN08:

(-) : absence de réaction, absence de la famille chimique recherchée

(+) : faible réaction, montrant une faible teneur de la famille chimique

(+ +) : réaction moyenne, montrant une teneur moyenne de la famille chimique

(+ + +) : forte réaction, montrant une forte teneur de la famille chimique

Pour étudier l’activité de l’extrait FHN08, son effet sur la protection de la muqueuse gastrique et sur la sécrétion acide gastrique ont été étudiés in vivo chez le rat.

Des rats de souche WISTAR, des deux sexes, âgées de 12 semaines, pesant entre 225 et 250g ont été utilisés. Ils ont été élevés à l’Animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, de la Faculté des Sciences, de l’Université d’Antananarivo. Ils ont été nourris avec de la provende LFL 1420 ont eu un accès libre à de l’eau. Ils ont été soumis à une alternance de lumière et d’obscurité de 12/12 heures et à la température de 20 °C environ. Ces animaux ont été mis à jeun 18 heures avant les tests, mais ont eu accès libre à de l’eau.

Afin d’étudier l’activité de l’extrait FHN08 sur la muqueuse gastrique, son effet contre l’action d’agents agresseurs a été étudié. Dans ce test, l’indométacine a été utilisée comme référence, et la surface de lésions provoquées par cette molécule sur la muqueuse gastrique des animaux traités avec l’extrait ont été comparée avec celle des animaux témoins pour estimer son activité sur la muqueuse gastrique (ELSON C.O. et coll., 1995).

Pour ce faire, des animaux à jeun depuis 18 heures ont été répartis en trois lots composés de trois rats: un lot témoin et deux lots traités avec l’extrait dissout dans de l’eau distillée. Les rats du lot témoin et ceux des autres lots ont reçu 30 mg/kg d’indométacine, par voie orale, une fois par jour pendant 5 jours, à la même heure, 1 heure avant l’administration de l’extrait (KHARES. et coll., 2008).

Une heure après l’administration de l’indométacine, les rats du lot témoin ont reçu 10ml/kg de l’eau distillée, tandis que les rats des 2 autres lots ont reçu l’extrait FHN08, par voie orale, aux doses de 300 et 600 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée (DIEL H. et HEINZ K., 2010).

Au 6ème jour, les rats ont été anesthésiés par inhalation d’éther di- éthylique (KAMGUIA G. et coll., 2011), puis une laparotomie a été effectuée, et leur estomac a été prélevé et incisé le long de la grande courbure. Il a été rincé avec de l’eau et étalé sur une surface plane. La surface des lésions ulcéreuses a été mesurée par planimétrie directe. Le contour des lésions a été tracé sur un papier millimétré transparent placé au-dessus de l’estomac étalé. La surface des lésions a été exprimée en millimètre carré (RAMAHOLIMIHASO F. et coll., 1997).

L’objectif du test a été d’étudier l’activité de l’extrait sur la sécrétion acide de l’estomac chez le rat. La ligature du pylore a été effectuée afin de provoquer une hypersécrétion acide dans la lumière gastrique des rats (SHAY H. et coll., 1945).

Des animaux à jeun depuis 18 heures avant le test ont été répartis en trois lots composés de trois rats: un lot témoin et deux lots traités avec l’extrait FHN08. Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale, et les animaux du deuxième et troisième lot ont reçu de l’extrait FHN08, par voie orale, aux doses respectives de 300 et 600 mg/kg dans 10ml/kg d’eau distillée (DIEL H. et HEINZ K., 2010).

Une heure après l’administration de l’eau distillée et de l’extrait, les rats ont été anesthésiés par inhalation de l’éther di-éthylique (KAMGUIA et coll., 2011). Une incision de 1 cm a été effectuée au niveau de la région épigastrique des animaux. Le pylore a été repéré, puis ligaturé à l’aide d’un fil à coudre (SHAY et coll., 1945). Ensuite, l’abdomen a été suturé et les rats ont été laissés se reposer dans une cage individuelle. Les animaux ont été privés de nourriture et d’eau pendant la période post – opératoire (PATIL A.N. et coll., 2012).

Quatre heures après la ligature de pylore, une laparotomie a été effectuée et l’estomac des animaux a été prélevé, puis son contenu a été versé dans un tube à essai. Ce fluide gastrique a ensuite été centrifugé à la vitesse de 3000 tours par minute pendant 10 minutes à l’aide d’une centrifugeuse (LABO MODERNE EBA 3S) (figure 2) (BURCI L.M. et coll., 2013). Après la centrifugation, le surnageant obtenu a été récupéré et le pH a été mesuré à l’aide d’un pH-mètre (PIERRON®) (figure 3).

Les résultats obtenus ont été exprimés sous forme de (m ± σ). Le test paramétrique «t» de Student a été utilisé pour comparer les moyennes, et la différence a été considérée comme significative pour une valeur de P<0,05.

A partir de 200g de poudre des feuilles sèches macérés dans le mélange éthanol-eau (60:40), 15g d’extrait FHN08 sont obtenus, soit un rendement de 7,5%. Son pH est légèrement acide, égal à 4,72.

Le criblage phytochimique effectué sur l’extrait FHN08 révèle la présence d’une forte teneur en stéroïdes et en triterpènes; une teneur moyenne en alcaloïdes; une faible teneur en leuco anthocyanes, en saponines et en tanins, tandis que les polysaccharides, les flavonoïdes et les sucres réducteurs y sont présents en très faible teneur (Tableau II).

L’administration répétée d’indométacine par voie orale pendant cinq jours provoque des lésions visibles à l’œil nu sur la paroi gastrique des rats. La surface de ces lésions au niveau de la paroi gastrique des animaux traités avec l’extrait FHN08 est inférieure à celle des animaux du lot témoin (Figures 4a, 4b, 4c).

Figure 4 a.   Lésions provoquées par l’indométacine, administrée par voie orale à la dose de 30 mg/kg, une fois par jours, pendant 5 jours au niveau de la paroi gastrique des animaux témoins.

Figure 4 b.  Lésions provoquées par l’indométacine, administrée par voie orale à la dose de 30 mg/kg, une fois par jours, pendant 5 jours au niveau de la paroi gastrique des animaux traités avec l’extrait FNH08, administré par voie orale, à la dose de 300 mg/kg.

Figure 4 c.   Lésions provoquées par l’indométacine, administrée par voie orale à la dose de 30 mg/kg, une fois par jours, pendant 5 jours au niveau de la paroi gastrique des animaux traités avec l’extrait FNH08, administré par voie orale, à la dose de 600 mg/kg.

Chez le lot témoin, la surface de lésions observées au niveau de la surface de l’estomac des animaux est égale à 18,33 ± 0,64 mm2 contre 7,33 ± 0,51 mm2 et 2 ± 0,4 mm2 chez les rats traités avec l’extrait FHN08, administré par voie orale, aux doses de 300 mg/kg et 600 mg/kg (P<0,05) (Figure 5).

Figure 5. Variation de la surface des lésions provoquées par l’indométacine, administré par voie orale, une fois par jour, pendant 5 jours, à la dose de 30 mg/kg, observées au niveau de la paroi gastrique chez les animaux du lot témoin   , et des lots traités avec l’extrait FHN08, administré par voie orale, 1 heure après l’administration de l’indométacine, aux doses de 300mg/kg  , et 600mg/kg   (n=3 ; ̅ ± σ ; P<0,05).

Quatre heures après la ligature du pylore, le pH du surnageant du contenu gastrique des rats traités avec l’extrait FHN08 est supérieur à celui des rats du lot témoin traités avec l’eau distillée. Il est égal à 2,16 ± 0,11 chez les témoins, contre 3,58 ± 0,18 et 5,15 ± 0,21 chez les rats traités avec l’extrait FHN08  aux doses de 300 et 600 mg/kg (P˂0,05) (Figure 6).

La plante que nous avions choisie dans ce mémoire est utilisée par la population de Talata Volonondry pour soulager la crampe et la brûlure d’estomac. En analysant ces données, nous avions émis des hypothèses, que cette plante pourrait avoir une activité mucoprotectrice et/ou anti-sécrétoire.

Les résultats de nos tests montrent que la surface des lésions au niveau de la paroi gastrique des animaux traités avec l’extrait et inférieur à celle des animaux témoins. Et cette surface diminue en augmentant la dose de l’extrait administré. Cela nous permet de dire que l’extrait protège la paroi gastrique contre l’effet d’indométacine. Deux hypothèses peuvent être avancées : soit l’extrait tapisse la paroi gastrique afin de la protéger contre l’agression de l’acide en absence de mucus et bicarbonate à la suite de la baisse du taux de prostaglandines, soit il stimule la sécrétion de mucus et de bicarbonate par l’intermédiaire des prostaglandines.

L’indométacine est un anti-inflammatoire non stéroïdien qui inhibe la cyclo-oxygénase, une enzyme responsable de la synthèse de prostaglandine (WALLACE J.L. (2008). Or la prostaglandine stimule la libération de mucus et des ions bicarbonates, améliore le flux sanguin artériel au niveau de la muqueuse gastrique contribuant à la protection de cette muqueuse (EMANUEL B. et REMY M. (2011). En diminuant le taux de prostaglandines qui est à l’origine de la diminution de la protection de la muqueuse gastrique, l’indométacine entraine la formation de lésions au niveau de la paroi gastrique.

D’après nos résultats, l’extrait FHN08 pourrait agir en protégeant la muqueuse gastrique contre l’agression de l’acide gastrique, grâce aux polysaccarides qu’il contient (GERMANO’M.P. et coll., 1996). Une autre possibilité serait qu’il agirait comme l’extrait des feuilles de Humbertia ambavilla qui protège la muqueuse grâce aux flavonoïdes qui stimulent la sécrétion de prostaglandines (BRILLANT S. et coll., 2006). Le criblage phytochimique effectué sur FHN08 a montré la présence de ces familles chimiques, ce qui nous permet d’émettre des hypothèses que les polysaccharides présents dans l’extrait FHN08 renforcent directement la protection de la muqueuse gastrique ou les flavonoïdes qu’il contient, stimulent la sécrétion de prostaglandines, augmentant la sécrétion de mucus pour protéger la muqueuse gastrique.