PFE & RAPPORT MISE AU POINT D ’ UNE TECHNIQUE SIMPLE ET RAPIDE DE DETECTION DES BACILLES DE KOCH VIVANTS DANS LES PRELEVEMENTS BIOLOGIQUES PDF
INTRODUCTION
GENERALITES
Maître ès Sciences
I- HISTORIQUE DE LA TUBERCULOSE
II- NOTIONS SUR LES MYCOBACTERIES
A- Caractéristiques bactériologiques des mycobactéries
B- CARACTERISTIQUES CHIMIQUES DES MYCOBACTERIES
III- ASPECTS CLINIQUES
IV- DIAGNOSTIC DE LA TUBERCULOSE
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE
DIAGNOSTIC moleculaire
1. Les sondes nucléiques
2. Les méthodes d’amplification génique
3. Le sérodiagnostic
IV- PREVENTION
VI- TRAITEMENT
VII- EVALUATION DE LA CHIMIOTHERAPIE
VIII- ETUDE DE LA VIABILITE DES CELLULES
A- LE DIACETATE DE CARBOXYFLUORESECEINE, SUCCINIMIDYL ESTER
Le KIT LIVE/DEAD® Baclight™
I- MATERIELS ET PRODUITS
MATERIELS BIOLOGIQUES
4. Souches bactériennes
2. Prélèvements biologiques
LES PRODUITS
1. Le Diacétate de Carboxyfluorescéine, Succinimidyl Ester
CARACTERISTIQUES
Nom 5-6- diacétate de carboxyfluorescéine, succinimidyl ester
[ 5 (6)-CFDA-SE]
Formule C22H19NO11
Forme poudre de 25 mg
2. Le kit LIVE/DEAD®
II- METHODES
A-PREPARATION DES REACTIFS ET TAMPONS
1. Réactifs pour la coloration au CFDA-SE
2. Réactifs pour le kit LIVE/DEAD®
3. Réactifs pour les solutions de décontamination
4. Réactifs pour la coloration de Ziehl-Neelsen
5. Réactifs pour la coloration à l’auramine [DEGOMMIER, J.,1957]
5. Réactifs pour milieux de culture
PREPARATION DES SUSPENSIONS BACTERIENNES
1. Culture de BCG et d’E. coli
Introduction
6. Méthode pour tuer les BCG
7. Préparation des suspensions bacillaires
METHODES DE COLORATION
2. Méthode de coloration à l’auramine
8. Méthode de coloration de Ziehl-Neelsen
9. Méthode de coloration au CFDA-SE (figure3)
10. Méthode de coloration par le kit LIVE/DEAD® (figure 4)
METHODE DE MISE EN CULTURE DES BCG SUR MILIEU DE LJ
MISE AU POINT DES METHODES DE COLORATION DES BCG VIVANTS DANS LES CRACHATS
INFECTES ARTIFICIELLEMENT
MISE EN EVIDENCE DES BK VIVANTS DANS LES PRELEVEMENTS BIOLOGIQUES
3. Mise en évidence des BK vivants par le CFDA-SE
4. Mise en évidence des BK vivants par le kit LIVE/DEAD®
11. Mise en culture
EVALUATION DES METHODES DE COLORATION AU CFDA-SE ET AU
I- MISE AU POINT DES TECHNIQUES DE COLORATION DES BACILLES AVEC LE CFDA-SE ET LELIVE/DEAD®
Préparation des BCG tués
MISE AU POINT DE LA TECHNIQUE DE COLORATION DES BACILLES AU CFDA-SE
MISE AU POINT DE LA TECHNIQUE DE COLORATION DES BACILLES AVEC LE KIT
LIVE/DEAD®
12. Essais sur E. coli
13. Essais sur les BCG
MISE AU POINT DES METHODES DE COLORATION AU CFDA-SE ET AVEC LE KIT LIVE/DEAD®
SUR DES CRACHATS INFECTES ARTIFICIELLEMNT DE BCG
II- EVALUATION DES METHODES DE COLORATION AU CFDA-SE ET AVEC LE KIT LIVE/DEAD® SUR DES CRACHATS DE MALADES TUBERCULEUX
A- RECRUTEMENT DES PATIENTS
Numéro Statut patient Sexe Age ED Régime de traitement.
3277 nouveau cas masculin 28 3+ 2ERHZ/6TH
3309 nouveau cas masculin 47 3+ 2ERHZ/6TH
3380 nouveau cas masculin 39 3+ 2ERHZ/6TH
3384 nouveau cas masculin 26 3+ 2ERHZ/6TH
3356 nouveau cas masculin 26 3+ 2ERHZ/6TH
3366 nouveau cas masculin 38 3+ 2ERHZ/6TH
4005 rechute masculin 34 3+ 2SRHE/1RHZE/5R3H3E3
4016 nouveau cas masculin 21 1+ 2ERHZ/6TH
4270 nouveau cas masculin 22 1+ 2ERHZ/6TH
4310 nouveau cas masculin 27 2+ 2ERHZ/6TH
B- TRAITEMENT DES CRACHATS
C-RESULTATS
ANNEXE 1
COMPOSITION CHIMIQUE DES SOLUTIONS ET DES MILIEUX DE CULTURE
1. Réactifs pour la coloration au CFDA-SE
2. Réactifs pour les solutions de décontamination
3. Réactifs pour la coloration de Ziehl-Neelsen
4. Réactifs pour la coloration à l’auramine [DEGOMMIER, J.,1957]
5. Réactifs pour milieux de culture
SUMMARY
Rapport PFE, mémoire et thèse avec la catégorie MISE AU POINT D ’ UNE TECHNIQUE |
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La tuberculose est une maladie infectieuse, contagieuse et endémique, à tropisme respiratoire très marqué, due à Mycobacterium tuberculosis. Environ un tiers de la population mondiale est infecté. Avec une mortalité annuelle de l’ordre de trois millions, la tuberculose constitue un fléau mondial très préoccupant pour une maladie médicalement curable dans la grande majorité des cas [SUDRE et al., 1992].
Plus de 90 % de tous les cas de tuberculose surviennent dans les pays en développement. L’incidence de la maladie reste la plus élevée en Afrique. Ceci est certainement dû à un niveau de revenu plus bas, à une faible efficacité des systèmes de santé et à l’épidémie du virus de l’immunodéficience humaine (VIH) [AUREGAN, 1993].
La découverte des médicaments antituberculeux et le développement de schémas thérapeutiques associant plusieurs antibiotiques a représenté un progrès décisif dans la lutte contre la tuberculose.
Cependant, le développement de l’épidémie du VIH/SIDA et l’insuffisance des moyens de santé dans les pays à faible revenu économique ont favorisé la recrudescence de la maladie avec des difficultés thérapeutiques accrues par le développement de la multirésistance du bacille tuberculeux aux antibiotiques [COLE, 1993], en particulier à la rifampicine et à l’isoniazide qui sont les deux antituberculeux majeurs.
Dans ce contexte, de nouveaux essais thérapeutiques avec des antituberculeux de seconde ligne sont aujourd’hui proposés mais méritent d’être évalués.
